正确的洗板操作对于降低ELISA实验中的变异和消除背景干扰至关重要。如果您正在使用自动化洗板设备或实验结果的变异程度高于预期，希望以下文章和视频能帮助您优化实验流程，确保实验结果回归正常。

手动洗板的优点

虽然ELISA洗板的目的是去除未结合的反应物，但过度洗板会不同程度上导致抗体与目标蛋白解离，从而导致吸光值偏低和%CV值偏高。此外，残留液体去除不完全（通常发生在自动洗板设备中）也会导致更高的检测背景，这些对HCP ELISAs检测尤为不利，因为其本身就具有较高的基线吸光值。

因此，Cygnus专家建议在使用Cygnus ELISA试剂盒时尽量采用手动洗板的方法。该方法简便易学，无需任何特殊设备。只要准备一些低纤维吸水纸和一个洗瓶就可轻松操作，需要注意的是洗瓶的出水口要修剪成大开口斜面以确保洗液的充分流动与合适的冲洗力度。

修剪洗瓶出水口

准备工作：稀释洗涤液并准备好洗板操作区域

用蒸馏水将20×的浓缩洗涤液稀释至1×洗涤液装入洗瓶内，将吸水纸铺开放在水槽旁边干净的工作台上。

注：请勿使用除ELISA试剂盒提供之外的其他洗涤液，这样可能会影响实验结果。

第一步：倒出ELISA孔板内的液体

用拇指按住ELISA板一侧的中间位置，用食指按住另一侧，从底部托起ELISA板。可以用拇指和食指扣住孔板条或板条两端的标签，以避免板条从板托中掉出。在水槽上方迅速翻转孔板，借助手臂的力量快速向下移动并突然停止，动作要连贯，让液体借助惯性从孔板内甩入水槽。在操作正确的情况下，手指、孔板条和板托外侧不应沾上任何液体。然后重复这个倾倒动作一次。

注：如果担心孔板条从板托中掉出，可以在每个孔板条上提前标注好位置。

第二步：用吸水纸吸干残留液体，然后轻轻拍板

立即将倒扣的孔板按压在吸水纸上，并将孔板移至吸水纸未使用的区域，轻轻拍板三次，每一次拍板都要在吸水纸未使用的区域。不要用力拍板，如果拍板力度过大会在板上传递不均匀的冲击能量，致使抗体/分析物复合物的解离。

第三步：清洗孔板

用装有1×洗涤液的洗瓶，从板的上边一侧开始，将洗涤液逐个填满所有孔到溢出，直至最后一个孔，然后再按照步骤1和2的方法丢弃洗涤液并轻轻拍板。

注：不用担心洗涤液从孔内溢出，但要避免洗涤液在孔内长时间浸泡。

重复上述步骤3次，总共进行4次洗板操作。需要注意的是，在第2次和第4次洗板时，要从板的下边一侧反方向逐孔加入洗涤液。这样操作可以确保所有孔的洗涤液总浸泡时间基本相同。另外，无需额外增加洗板次数，这样可能会使结合在抗体上的分析物解离，导致检测灵敏度降低。

最后一次洗板后，还是按照步骤1和2所述的方法吸干/轻拍吸水纸。然后将ELISA板倒扣在吸水纸上静置约20秒，以便彻底排干残留液体，最后再在吸水纸上拍板4次。

注：每次拍板后，孔板最好能在手中水平旋转180度，这样可以确保板两端的受力更加均匀。

第四步：擦干多余液体

用干净的吸水纸擦拭孔板的底部外部，清除残留的洗涤液。最后将洗好的ELISA板放回到实验操作台并加入底物。

注：不要让孔板彻底晾干，否则酶的活性将会受到影响。底物要远离水槽，因为洗板过程可能会产生气溶胶，导致孔板或者底物被污染，影响检测结果。

最后，请观看以下洗板操作视频，帮助您快速掌握这一精确的技术！

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