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支原体污染解决方案，给细胞更多的安全与保护

什么是支原体？

支原体是一种大小介于细菌和病毒之间(最小直径 0.2μm)并独立生活的微生物，没有细胞壁，表面由胞质膜构成，约有 1%的支原体可通过滤菌器。支原体污染细胞后，培养液可不发生混浊，多数情况下细胞病理变化轻微或不显著。细微变化也可由于传代、换液而缓解，因此易被忽视。但个别严重者，可致细胞增殖缓慢，甚至从培养器皿脱落。支原体污染细胞后会影响下游试验结果。

为什么要重视细胞培养中的支原体污染？

1、污染率高：在细胞研究领域，支原体是臭名昭著的污染源，二十世纪九十年代的支原体污染率是四分之一，而目前有仍然有超过十分之一的基因表达研究（许多曾发表在顶尖杂志上），表现出支原体污染的迹象；

2、影响日趋严重：虽然支原体污染并不一定意味着研究结果无效，但它会影响数百个基因的表达，并与细胞竞争营养阻碍细胞的生长。在目前测试的一组受污染的数据中（淋巴瘤细胞），已经鉴定出 61 个被支原体改变的基因，干扰了实验结果。这无疑是对时间，资源，经费很大的浪费；

3、难察觉：支原体污染完全是不留痕迹的，污染后的细胞生长速率一般并未发生显著的影响，无法用肉眼识别，除非采用专门的支原体检测方法检测；

4、污染源多：“草率操作”、细胞系流通的交叉污染、操作人员自身都是很重要的污染源；

5、难去除：支原体体积小，无细胞壁，约有 1%的支原体可通过过滤器，且一般抗生素根本无法有效抑制或者去除支原体，另外，部分抗生素使用后会对细胞产生敏感效果，从而影响细胞的状态；

6、重视程度日益增加：学术杂志发表实验结果需验证支原体污染影响，在国际上，支原体污染检测已经日益成为细胞培养污染常规检测之一，同时也是有效规避支原体污染的重要方法之一。

世界性难题！！！！Nature 収布癿文献表明细胞研究领域中存在严重的支原体污染问题

Ewen Callaway. Contamination hits cell work. Nature, 29 July 2014; doi:10.1038/511518a

如何保护细胞细胞不受支原体的污染？

tyc1286太阳集团代理的德国 PanReac Applichem 所提供 Myco 系列支原体清除产品可以直接整合到质膜上破坏支原体的完整性，从而有效地清除支原体污染，而且没有细胞毒性。另有支原体检测与预防系列产品可以给细胞提供更多的安全保护。

一、AppliChem 支原体清除系列

对于普通细胞系，遭受污染以后可以通过重新复苏，购买等途径更换样本，但是对于一些较难获得的珍贵样本，如干细胞，原代细胞，经过特殊处理的，或订购困难的细胞，一旦遭受支原体污染后，一定要马上进行处理。AppliChem研发的支原体清除的 Myco 系列产品，可以直接整合到质膜上破坏支原体的完整性，从而有效的清除支原体污染，并可以针对不同程度，不同细胞样本进行针对性处理，处理过程简单，对细胞不会造成任何副作用。

名称	主要成分	适用样本	使用斱法
Myco-3 （货号 A5240）	环丙沙星	贴壁细胞，可清除大多数支原体污染	100 倍稀释加入培养基，每 2-3 天换液，连续处理14天
Myco-1 （货号 A5222）	泰妙菌素	贴壁细胞，配合能解决顽固型支原体或者使用 Myco-3 处理停用后又出现支原体污染的情况	100 倍稀释加入培养基，与 Myco-2 配合使用。使用 Myco-1 处理 4 天后换 Myco-2 处理 3 天，如此重复 2-3 次即可
Myco-2 （货号 A5233）	二甲胺四环素	贴壁细胞，配合能解决顽固型支原体或者使用 Myco-3 处理停用后又出现支原体污染的情况

二、AppliChem 细胞污染预防系列

有效保护细胞的最好方式是对于细胞培养环境的预防，如工作环境定期消毒处理，严格实验操作，保证器皿无菌等各方面。在实验室中，CO2 培养箱，CO2 培养箱水盘，水浴锅是非常重要的污染源。AppliChem 研发有系列污染预防系列产品专门针对这 3 大污染源，可有效预防真菌（及芽孢）、细菌、病毒等污染。使用方便，无腐蚀性，安全高效。

名称	适用环境	预防微生物	使用斱法
Incubator-Clean （货号 A5230）	CO2 培养箱，工作等台等	支原体，真菌及芽孢、细菌、病毒（包拪 HIV，HBV 等）	即用型，喷雾处理完全湿润即可，无需转移出细胞，建议每 2 周处理一次
Incuwater-Clean （货号 A5219）	C02 培养箱水盘	支原体，真菌及芽孢、细菌、病毒（包拪 HIV，HBV 等）	100 倍稀释加入水盘灭菌水中，建议每 2-4 周更换灭菌水
Aquabator-Clean （货号 A9390）	水浴锅	细菌，真菌	100 倍稀释加入水浴锅，建议每 1-2 周吐水浴锅加入一次，每 4-6 周给水浴锅更换一次水

三、Applichem 支原体检测系列

传统的支原体检测方法包括支原体分离培养、支原体特异酶检测、DNA 荧光染色检测以及 PCR 检测，除 PCR 检测方法以外，其他检测方法大多耗时长，要求检测人员具有丰富的经验，并且无法获得足够的灵敏度和特异性，对于一些稀有的支原体亚种无法有效检测。

AppliChem 设计的支原体检测试剂盒系列产品均是基于 PCR 方法，根据支原体 16S rRNA 保守序列设计引物，经过 PCR 反应扩增其 16S rRNA 片段，后采用琼脂糖电泳方法检测 270bp 条带。相对传统方法而言，具有强大优势：

高灵敏度：敏感度高达 100~1000CFU/ml，仅需要 0.5 - 1.0 ml 细胞上清样本即可检测；
检测品种广泛：可检测常规品种，同时对于稀有亚种也能同效检测，如 M. pneumoniae, Acholeplasma laidlawii, M. synoviae, M. pulmonis,M.bovis，几乎覆盖自然界 80 余个品种；
快速：操作时间只需 30 分钟，全程 5 个小时内即可得到检测结果；
可靠：试剂盒中包括有阳性对照 DNA，可保证实验结果的可重复性，减小因操作带来的误差；
安全性：无支原体培养过程，有效避免污染扩大。

产品型号

检测方法

适用仪器

试剂盒组分

PCR Mycoplasma Test Kit

（货号 A3744）

普通 PCR-电泳检测

普通 PCR 仪器

Reaction Mix Buffer Solution

Positive Template Control

qPCR Mycoplasma Test Kit

（货号 A9019）

荧光定量 PCR

LightCycler®1.2, 1.5, 2.0, 480, Rotor-Gene™ 3000, 6000, ABI Prism® 7000, iCycler iQ®, iQ™5, Opticon 2, Chromo 4, MX300P®, MX4000®.

Primer/Probe/Nucleotide Mix(RED) Rehydration Buffer(BLUE)

Positive Control DNA(GREEN) Internal Control DNA(YELLOW) PCR Grade Water(WHITE)

tyc1286太阳集团是PanReac Applichem 中国总代理，为用户提供完善的技术支持与售后服务。如对产品感兴趣欢迎拨打tyc1286太阳集团客服热线400-050-4006或登录网站www.xmjsci.com了解更多信息。